andrey

Путь к Файлу: /Астраханский государственный технический университет / Бакалавриат / Занятие.doc

Ознакомиться или скачать весь учебный материал данного пользователя
Скачиваний:   1
Пользователь:   andrey
Добавлен:   26.01.2015
Размер:   123.5 КБ
СКАЧАТЬ

Занятие №7

 

Тема занятия: Иммунологические реакции и их практическое применение. Реакция агглютинации, ее виды и применение.

Актуальность темы: Реакции иммунитета получили широкое распространение, как в инфекционной, так и неинфекционной иммунологии. С их помощью идентифицируют органные и тканевые антигены, обнаруживают антитела при иммуногематологических конфликтах, аллергических заболеваниях, аутоиммунных поражениях. В лабораторной практике широко применяется реакция агглютинации для диагностики инфекций и серологической идентификации возбудителей.

Цель занятия: Изучить механизм и практическое применение иммунологических реакций; реакции агглютинации, уметь поставить и учесть результаты ориентировочной и развернутой реакции агглютинации.

ЭКСПРЕСС-ИНФОРМАЦИЯ: Агглютинация – склеивание антигеннесущих корпускулярных частиц молекулами комплиментарных антител в присутствии электролита с образованием видимого невооруженным глазом агглютината. Реакция агглютинации протекает в две фазы. Первая – специфическое соединение активного центра антитела с детерминентой антигена (присутствие электролита не обязательно). Эта фаза не сопровождается видимыми изменениями системы. Вторая фаза – склеивание антигенов. Для ее проявления необходим о присутствие электролитов, которые снижают электрический заряд комплекса антиген+антитело и ускоряют реакцию. Эта фаза сопровождается  видимым изменением среды за счет склеивания антигенов и выпадения их в осадок. Склеивание антигена осуществляется за счет связывания минимум двухвалентными антителами поливалентных антигенов, в результате чего образуются комплексы связанных макромолекулярных антигенов через антитела.

Компоненты реакции агглютинации:

1. Антиген (агглютиноген) – взвесь клеток или иных корпускулярных частиц

2. Антитела (агглютинины) – иммунная сыворотка больного или полученная путем искусственной иммунизации животных  соответствующим антигеном

3. Электролит –изотонический раствор хлористого натрия.

В лабораторной практике реакция агглютинации используется для серодиагностики и сероидентификации микроорганизмов.

Если реакция ставится с целью сероидентификации, то в ней участвуют следующие компоненты:

1. Антиген – чистая культура микроба неизвестного вида, выделенная из организма человека или из внешней среды.

2. Антитела – известная агглютинирующая сыворотка

3.  Электролит – изотонический раствор хлористого натрия.

Положительный результат указывает, что неизвестный микроб идентичен тому, который был взят в качестве антигена для приготовления агглютинирующей сыворотки.

При постановке реакции агглютинации с целью серодиагностики в качестве антигена берется взвесь убитых бактерий известного вида (диагностикум), антитела – сыворотка крови больного или реконвалисцента. Положительный результат указывает на то, что в сыворотке крови имеются агглютинины к определенному, известному виду микроба, т.е. данный микроб является возбудителем заболевания, в процессе которого накопились защитные антитела. Серодиагностику с помощью реакции агглютинации широко применяют при брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля), бруцеллёзе (реакции Райта и Хеддельсона), сыпном тифе (реакция Вейгля), туляремии.

Диагностические агглютинирующие сыворотки получаю путем иммунизации кролика известными полноценными антигенами. В краевую вену уха кролика или подкожно вводят 0,5 мл взвеси убитых микробов (1млрд микробных клеток в 1 мл) трехкратно с интервалом 5-7 дней. На 10 день после последней инъекции из сердца берут кровь, получают сыворотку, определяют ее титр.

Титр агглютинирующей сыворотки считают то ее наибольшее разведение, которое еще вызывает феномен агглютинации.

Для сероидентификации агглютинирующие сыворотки выпускают нативные (неадсорбированные) и адсорбированные. Неадсорбированные сыворотки имеют высокий титр. Недостатком их является то, что они не лишены антител к гетероантигенам различных микроорганизмов, за счет чего способны давать перекрестные реакции. Адсорбированные сыворотки отличаются строгой специфичностью, но обладают низким титром. Они применяются в основном в реакции агглютинации на стекле, разведению не подлежат.

Существует два основных метода постановки реакции агглютинации: ориентировочная на стекле и развернутая пробирочная.

Реакцию агглютинации на стекле ставят на обезжиренном спиртом предметном стекле, на которое пастеровской пипеткой наносят капли сыворотки в небольших разведениях (1:10, 1:20). В каждую каплю сыворотки вносят петлю 24-агаровой живой культуры или пастеровской пипеткой одну каплю взвеси убитых микробов (диагностикума) и тщательно перемешивают. Постановка реакции сопровождается контролем антигена а контролем сыворотки. Учет реакции проводят через 10-15 минут. Реакция позволяет только установить наличие антител, но не дает возможности судить об их титре.

 Развернутая реакция агглютинации ставится с разведениями сыворотки. При этом учитывается не только наличие антител, но и их количество, т.е. титр сыворотки во все пробирки, кроме пробирки контроля сыворотки, вносят антиген – диагностикум или свежеприготовленную взвесь микробов. При постановке реакции ставят два контроля:

1. Контроль сыворотки – для исключения выпадения в осадок сывороточного белка, что может наблюдаться при неправильном заборе крови (горячим шприцем)

2. Контроль диагностикума – для исключения спонтанной агглютинации бактерий, которая может наблюдаться при неправильном хранении диагностикума или при неправильном его приготовлении (из R-форм).

При положительном результате реакции на дне пробирки образуется осадок из склеившихся бактерий в виде зонтика, жидкость в пробирке в большей или меньшей степени просветляется. Учет реакции ведется невооруженным глазом, при помощи лупы или агглютиноскопа. Чтение реакции начинается с контролей:

1. Контроль сыворотки – жидкость в пробирке должна быть прозрачной

2. Контроль диагностикума – жидкость в пробирке должна быть равномерно мутной.

 Интенсивность реакции агглютинации выражается плюсами, при этом учитывают прозрачность надосадочной жидкости и выраженность хлопьев:

++++ - жидкость совершенно прозрачна, хлопья крупные, хорошо выражены;

+++ - жидкость слегка мутная, хлопья крупные, хорошо выражены;

++ - жидкость мутная, хлопья мелкие, но ясно выражены;

+ - жидкость мутная, хлопья выражены неясно, реакция сомнительная;

- - жидкость мутная, хлопьев нет, реакция отрицательная

Реакция агглютинации может протекать по типу С- или Н-агглютинации. У безжгутиковых бактерий, имеющих только соматический 0-антиген, происходит склеивание непосредственно самих микробных клеток и агглютинат имеет мелкозернистый характер. Эта форма агглютинации протекает медленно, в течение 19-24 часов при температуре 370 С. При наличии у бактерий жгутикового антигена (Н-антиген) клетки склеиваются жгутиками, при этом образуется крупнохлопчатый осадок и реакция протекает значительно быстрее ( в течение 2 часов при температуре  370 С.

Более чувствительной является реакция непрямой агглютинации (РНГА), которая позволяет выявить антитела в более низких титрах. Для этой реакции антиген адсорбируется на поверхности эритроцитов, которые в таком «нагруженном» состоянии приобретают способность агглютинировать антитела иммунной сыворотки, комплиментарными данному антигену.

РНГА ставится в пластинках из органического стекла с лунками. Компоненты РНГА с целью серодиагностики:

1. Антиген – эритроцитарный диагностикум

2. Антитела – сыворотка больного

3. Электролит – изотонический раствор хлористого натрия.

РНГА считается положительной, если образуется осадок эритроцитов с неровными краями в виде «зонтика». Это свидетельствует о том, что в сыворотке больного имеются антитела к данному антигену. Если же образуется компактный осадок эритроцитов с ровными краями в виде «пуговки», то РНГА считается отрицательной.

РНГА может быть поставлена и с целью сероидентификации, тогда в качестве антитела будет использоваться известный антительный  эритроцитарный диагностикум.

При помощи прямой и непрямой реакции агглютинации определяют полные (минимум бивалентные) антитела. Неполные (моновалентные, блокирующие) антитела не выявляются этими методами, т.к. соединяясь с антигеном, блокируют его, но не могут вызвать агрегации частиц в крупные конгломераты. Для выявления неполных, например, антирезусных антител используют реакцию-пробу с антиглобулиновой сывороткой (реакция Кумбса). Реакция проходит в два этапа:

1. Фиксация на эритроцитах (резус+) неполных антиэритроцитарных антител, содержащихся в сыворотке крови;

2. Обнаружение агглютинации эритроцитов при добавлении антиглобулиновой сыворотки, которая взаимодействует с фиксированными на эритроцитах неполными антителами.

Различают прямую и непрямую реакции Кумбса.

Прямая реакция Кумбса ставится с эритроцитами новорожденного ребенка для обнаружения адсорбированных на них неполных антител. К эритроцитам добавляют антиглобулиновую сыворотку, которую получают на кроликах, иммунизируя их иммуноглобулинами человека. Если на эритроцитах адсорбированы неполные антитела, то под влиянием антиглобулиновой сыворотки произойдет склеивание эритроцитов.

Непрямая реакция Кумбса ставится при обнаружении неполных антител в сыворотке беременной женщины. В этой реакции участвуют: исследуемая сыворотка, взвесь резус+ эритроцитов (резус- эритроциты используются в качестве контроля) и антиглобулиновая сыворотка. Если в сыворотке женщины имеются неполные антитела, то они адсорбируются на поверхности резус+ эритроцитов, которые склеиваются при добавлении антиглобулиновой сыворотки. С резус- эритроцитами реакция не идет.

Контрольные вопросы по теме занятия:

1. Механизмы взаимодействия антител с антигенами.

2. Определение серологических реакций, их компоненты.

3. Фазы реакции антиген+антитела.

4. Серодиагностика и сероидентификация, их практическое применение, компоненты.

5. Принципы получения диагностических сывороток.

6. Реакция агглютинации, ее компоненты, техника постановки, учет результатов, оценка.

7. Разновидности реакции агглютинации:

Реакция непрямой гемагглютинации, ее преимущества.

Реакция Кумбса (прямая и непрямая)

8. Практическое значение реакции агглютинации.

ДЕМОНСТРАЦИЯ:

1. Агглютинирующие сыворотки.

2. Диагностикумы.

3. Диагностикумы эритроцитарные антигенные.

4. Диагностикумы эритроцитарные антительные.

5. Плексиглазовые пластины с лунками для постановки РНГА.

6. Пластины с РНГА.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ:

1. Постановка  ориентировочной реакции агглютинации на стекле с целью серодиагностики брюшного тифа.

Оснащение: сыворотка больного в разведении1:10, брюшнотифозный диагностикум, обезжиренное предметное стекло, физиологический раствор, пастеровские пипетки.

Для постановки реакции на стол даются 3 пробирки: одна с сывороткой больного брюшным тифом в разведении 1:10,  вторая – с брушнотифозным диагностикумом, третья – физиологическим раствором, 2 пастеровские пипетки.

На обезжиренное предметное стекло пастеровской пипеткой наносят каплю физиологического раствор (контроль), рядом этой же пипеткой – каплю сыворотки в разведении 1:10.

В каждую каплю другой пастеровской пипеткой добавляют каплю брюшнотифозного диагростикума и тщательно перемешивают.

Реакцию учитывают через 5-10 минут.

Ожидаемый результат: контрольная капля физиологического раствора остается равномерно мутной, т.к. там отсутствуют антитела. В капле с сывороткой появятся хлопья – это положительная реакция.

2. Постановка развернутой реакции агглютинации в пробирках с целью серодиагностики брюшного тифа (реакции Видаля).

Оснащение: сыворотка больного брюшным тифом в разведении 1:100, брюшнотифозный диагностикум, стерильные пипетки (1,0; 2,0), стеклянный капилляр, пробирки, таблица р. Видаля.

Для постановки реакции Видаля на стол даются 3 пробирки: одна с физиологическим раствором, другая – с сывороткой больного в разведении 1:100 и третья – с брюшнотифозным диагностикумом, 2 мерных пипетки, стеклянный капилляр, 6 бактериологических (или агглютинационных) пробирок.

Пронумеровать все пробирки (6) – 1, 2, 3, 4, КС, КД.

Мерной пипеткой разлить по 0,5мл физиологического раствора во все пробирки за исключением первой и контроля сыворотки (кс).

Этой же пипеткой налить в КС, первую и во вторую пробирки по 0,5 мл сыворотки в разведении 1:100.

Перемешать сыворотку с физиологическим раствором во второй пробирке и перенести пипеткой 0,5 мл в третью пробирку, после перемешивания 0,5 мл разведенной сыворотки перенести таким же образом из третьей в четвертую. Из четвертой пробирки 0,5 мл жидкости удаляется и пипетка с этой жидкостью выбрасывается в вазу с дезинфицирующим раствором.

Во все пробирки, кроме КС, но уже стеклянным капиляром, добавляют брюшнотифозный диагностикум по 3 капли.

Пробирки энергично встряхивают вместе со штативом (для перемешивания антигена с антителом) и помещают в термостат на 2 часа, после чего читают предварительный результат. Окончательный результат опыта регистрируют через 24 часа.

 

 

 

 

ЗАНЯТИЕ №8

 

ТЕМА ЗАНЯТИЯ: Реакция  преципитации, ее виды и практическое применение.

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ: Иммунология является не только теоретическим, но и практическим разделом медицины. Реакции иммунитета вообще, и реакции преципитации, в частности, лежат в основе значительного количества лабораторных методов диагностики заболеваний, идентификации и дифференцировки микроорганизмов, изучения антигенной структуры бактерий и сложных белков организма человека и животных. Реакция преципитации является высокочувствительным тестом, так как позволяет обнаружить ничтожно малые количества антигенов. Чрезвычайно большое значение реакция преципитации имеет в судебно-медицинской практике для определения видовой принадлежности пятен крови, в санитарной практике с ее помощью определяют фальсификацию продуктов, в клинике – для оценки иммунного статуса по концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Знать реакцию преципитации и ее разновидности, уметь поставить и учесть результаты реакции Асколи.

ЭКСПРЕСС-ИНФОРМАЦИЯ: Сущность данной реакции состоит в осаждении антигена (преципитиногена), находящегося в дисперсном коллоидном состоянии, под воздействием специфических антител (преципитинов) в растворе электролита.

Одна из разновидностей реакции преципитации – кольцеприципитация – впервые предложена Асколи в 1902 году. Она заключается в следующем: сыворотка и антиген наслаиваются друг на друга так, чтобы между ними сохранялась граница раздела. В случае соответствия АГ и АТ происходит образование преципитата на границе этих двух жидкостей. Реакция кольцепреципитации позволяет определить АГ в разведениях его до 1:100000. Эта реакция чувствительнее многих других химических реакций, поэтому до настоящего  времени она применяется для решения различных задач: для ретроспиктивной диагностики сибирской язвы, туляремии и других заболеваний.

С 1949 года широкое распространение нашел метод диффузной преципитации в геле. Известны разновидности: простой диффузии в агаровый гель и двойной диффузии по Оучтерлони. Метод двойной диффузии отличается большей чувствительностью и меньше зависит от колебаний температуры, при его применении реже образуются артефакты, он обеспечивает получение положительных результатов при всех количественных отношениях между АГ и АТ.

Последовательность этапов иммунодиффузии по Оучтерлони:

1. приготовление агара

2. Нанесение слоя на предметные стекла

3.  Вырезание лунок

4. Внесение АГ и антисыворотки

5. Иммунодиффузия – 24 час.

6. Элюирование, высушивание, окрашивание (амидовый черный)

Метод базируется на диффузии АГ и АТ в агаровом геле, они диффундируют навстречу друг другу и в месте контакта образуют линии преципитации.

Метод Оучтерлони пригоден для установления идентичности АГ или для определение перекрестных реакций (см. рисунки), кроме того он часто служит для оценки иммунных сывороток и для контроля чистоты белковых препаратов.

 

 

 

 

 

Схема постановки реакции двойной иммунодиффузии с целью идентификации антигена                                                                                                                                                                                                                                                                                                                            

ЗанятиеЗанятиеЗанятиеЗанятиеЗанятие

 

 
                 

Занятие
 

 

 

 

 

 

 

 


    Антигены идентичны                                Антигены частично идентичны    

ЗанятиеЗанятиеЗанятиеЗанятиеЗанятие                                                                             

 

 

 

 

 

 

 

 

 

                                        Антигены не идентичны      

 

А и В – антигены

I – антисыворотка к антигену А

2 – антисыворотка к антигенам А и В

 

Полуколичественное определение антигена

ЗанятиеЗанятиеЗанятиеЗанятиеЗанятиеЗанятиеЗанятиеЗанятиеЗанятиеЗанятие                                                                                                   

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ИС – Иммунная сыворотка

1-8 – Разведения антигена

Иммунодиффузия по Манчини проводится по следующим этапам:

1. приготовление агара

2. Получение антисывороток

3. Смешивание I и 2 и нанесение слоя на предметные стекла

4. Вырезание лунок

5. Внесение раствора антигена

6. Иммунодиффузия (20 град., 48 час.)

7. Элюирование, высушивание, окрашивание, измерение.

Антиген радиально диффундирует из стартовой лунки в слое агарового геля, в результате образуется округлая зона преципитации, площадь которой пропорциональна концентрации антигена. Эта методика широко применяется для определения концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови.

Иммуноэлектрофорез   - представляет собой сочетание электрофореза в агаровом геле с последующей иммунодиффузией. После электрофоретического разделения антигенов в канавку, идущую параллельно пути движения антигенов, вносят преципитирующую иммунную сыворотку. АГ и АТ диффундируют навстречу и образуют на месте встречи дугообразные полосы преципитации. Последовательность операций:

1. Приготовление агара

2. Нанесение слоя на предметные стекла

3. Вырезание лунок для антигена и канавок для антисыворотки

4. Внесение образцов антигена

5. Электрофорез

6. Внесение антисыворотки

7. Иммунодиффузия (48 час.)

8. Элюирование, высушивание, окрашивание.

Иммуноэлектрофорез в клинике применяется для определения парапротеинов, для диагностики недостаточности того или иного белка плазмы крови, а также для идентификации и контроля белков.

Получение преципитирующих сывороток: животных (чаще всего кроликов) иммунизируют соответствующим антигеном (преципитиногеном).

Титр иммунной сыворотки определяют по наибольшему разведению антигена, которое дает преципитацию с данной сывороткой.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ:

1. Определение  понятия «преципитация»

2. Механизм, техника постановки различных видов реакции преципитации: реакции Асколи, реакции двойной диффузии в агаре по Оучтерлони, реакции Манчини, иммуноэлектрофореза.

3. Диагностическое применение различных вариантов реакции преципитации.

4. Получение преципитирующих сывороток, их титр.

ДЕМОНСТРАЦИЯ:

1. Преципитирующая сибиреязвенная сыворотка для постановки реакции Асколи.

2. Преципитирующие сыворотки против белков крови человека для постановки реакции Манчини.

3. Окрашенные пластины с результатами реакции Манчини, поставленной для определения концентрации иммуноглобулинов А, М, J.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ:

1. Прочитать реакцию Видаля, поставленную на предыдущем занятии, определить ее титр, дать оценку.

2. Постановка реакции кольцепреципитации по Асколи с целью ретроспективной диагностики сибирской язвы.

Оснащение: преципитирующая  сибиреязвенная сыворотка, изготовленная путем иммунизации баранов соответствующим антигеном, исследуемый антиген, который извлекается из исследуемого материала (кожи, шерсти, кусочки органов) с помощью кипячения с последующей фильтрацией. Антиген должен быть прозрачным, перед постановкой реакции разводится не менее, чем в 1000 раз. Физиологический раствор, специальные узкие пробирки, пастеровские пипетки.

В пробирки наливают 0,2 мл преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, затем при помощи пастеровской пипетки осторожно наслаивают на сыворотку 0,2 мл антигена (спускают жидкость по стенке пробирки так, чтоб она не смешивалась с сывороткой, а образовала над ней верхний слой.

При положительной реакции сразу же или через 5-10 минут на границе обеих жидкостей образуется мутное кольцо от выпавшего в осадок АГ. Степень реакции оценивается по величине кольца и времени его появления. К опыту ставится несколько контролей:

1. Заведомо известный АГ,+ специфическая преципитирующая сыворотка;

2. Преципитирующая сыворотка + физиологический раствор;

3. Нормальная сыворотка + исследуемый АГ.

В первом контроле реакция преципитации – положительная, в двух других отрицательная.

ТЕМЫ ДЛЯ УЧЕБНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОЙ РАБОТЫ:

1. Количественная оценка реакции преципитации по Гейдельбергу и Кэнделлу. (Кривая преципитации Гейдельберга).

2. Электроиммунодиффузия по Лореллу.

3. Сравнение чувствительности различных видов реакции преципитации.

 

Занятие №9

 

ТЕМА ЗАНЯТИЯ: Реакция нейтрализации, ее виды и механизм, практическое применение в бактериологии и вирусологии.

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ: реакция нейтрализации является достоверным, надежным и высокоспецифическим методом, что дает возможность использовать ее для диагностических целей, а также для идентификации токсинов различных возбудителей инфекционных заболеваний. Большое практическое значение приобрела реакция нейтрализации дифтерийного токсина антитоксической дифтерийной сывороткой, которая позволяет выявить токсинообразование у дифтерийных бактерий, выделенных от больных и носителей. В настоящее время реакция нейтрализации применяется как основная реакция в диагностике вирусных инфекций. Она может быть использована для идентификации вируса по заранее известным вируснейтрализующим антителам и для выявления специфических антител по заранее известному вирусу.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Изучить виды и механизмы реакции нейтрализации, знать практическое применение реакции флокуляции, научиться титровать антитоксические сыворотки.

ЭКСПРЕСС-ИНФОРМАЦИЯ: Реакция нейтрализации (флокуляция) – это иммунная реакция между экзотоксином (анатоксином) и антитоксином в присутствии электролита. Токсин в смеси с комплиментарной антитоксической сывороткой не проявляет своего токсического действия. Токсичность экзотоксина зависит от наличия активного центра. Антитела антитоксины блокируют активный центр, при этом токсин не разрушается, а только нейтрализуется. Реакция нейтрализации проводится как ин виво, например, на курином эмбрионе, на экспериментальных животных, так и ин витро. Реакция флокуляции является разновидностью реакции преципитации, но антигеном будет не любое высокомолекулярное вещество, а именно токсин. При этом образуется крупный комплекс молекул АГ+АТ – флокулят, видимый на глаз или в виде помутнения в жидкой среде или в виде усиков флокулята в агаре.

Компоненты реакции:

1. Антиген – экзотоксин или акатоксин,

2. Антитело – антитоксическая сыворотка,

3. Электролит – изотонический раствор хлористого натрия.

I. Определение токсигенности дифтерийной палочки производится методом флокуляции в агаре по Инеку и Оучтерлони. Определение токсигенности имеет большое значение при изучении культур, выделенных от больных и носителей, так как патогенность возбудителей дифтерии обусловлена их токсигенностью. В основу метода положен принцип взаимодействия дифтерийного токсина и антитоксической сыворотки, диффундирующих в толщу агара и образующих в нем зоны преципитации. В стерильные чашки Петри разливается абсолютно прозрачная среда. На середину чашки помещают стерильную полоску фильтровальной бумаги, пропитанную антитоксической противодифтерийной сывороткой, содержащей 500 МЕ в 1 мл. Культуры бактерий, подлежащих исследованию на токсигенность, засевают бактериологической петлей в виде бляшек диаметром 1 см вдоль обеих сторон фильтровальной бумаги на расстоянии 0,5 см друг от друга и от краев бумажной полоски. На одной чешке испытываются одновременно опытные и контрольные культуры. Контролем служит заведомо токсигенный штамм, который засевается между исследуемыми культурами. Чашки с посевами помещают в термостат при 370С  на 48-72 часа. Токсигенность дифтерийных палочек определяется по появлению белых линий – стрел флокулята, образовавшихся в результате взаимодействия токсина и антитоксина.

II. Реакция флокуляции используется при титровании антитоксических сывороток по известному токсину. Это явление так называемой инициальной флокуляции, которая произойдет сразу в той пробирке, где соотношение антигена и антител будет наиболее оптимальным и будет выглядеть в виде кольца флокуляции.

III.в медицинской практике реакция нейтрализации используется с лечебной целью, когда больному вводят лечебные антитоксические сыворотки, которые нейтрализуют экзотоксин.

IV. реакция нейтрализации лежит в основе пробы Шика. Пробу Шика ставят детям с целью выявления состояния противодифтерийного антитоксического иммунитета. Для этого используют очищенный дифтерийный токсин с точно установленной активностью. В 0,2 мл раствора содержится 1/40 часть одной смертельной для морской свинки дозы (одна Шик-доза). Токсин вводят внутрикожно в дозе 0,2 мл в средней части ладонной поверхности обычно левого предплечья. Учет результатов пробы производят через 48-72 часа. Дифтерийный токсин в малых дозах при внутрикожных введениях человеку вызывает в месте введения воспалительную реакцию в виде красноты и инфильтрата (положительная реакция Шика). Она свидетельствует о том , что антитоксины отсутствуют в циркулирующей крови или имеются в незначительном количестве. У людей, иммунизированных против дифтерии, и имеющих в крови специфические антитоксины, после введения токсина воспалительная реакция не наблюдается за счет нейтрализации токсина антитоксином (отрицательная реакция Шика). Детей с положительной реакцией Шика необходимо дополнительно вакцинировать против дифтерии АД или АДС анатоксином. Дети с отрицательной реакцией Шика дополнительным прививкам не подлежат. 

V. Реакцию нейтрализации в биопробе по Вайнбергу используют для идентификации токсинов различных возбудителей инфекционных заболеваний. Так как реакция токсина с антитоксином строго специфична, для постановки реакции нейтрализации необходимо иметь диагностическую строго типоспецифическую антитоксическую сыворотку по отношению к каждому виду, типу токсина. В пробирки разливают испытуемую жидкость, содержащую токсин. Количество пробирок соответствует тому количеству диагностических сывороток, с которыми предполагается испытывать материал. Одну пробирку берут для контроля. В нее вместо сыворотки добавляют физиологический раствор. Затем к испытуемому материалу добавляют диагностическую сыворотку. После тщательного перемешивания и выдерживания при комнатной температуре 30-45 минут, с целью нейтрализации токсина антитоксином, смесь вводят по 1 мл мышам внутривенно, подкожно или внутрибрюшинно в зависимости от исследуемого материала. Контрольные мыши получают исследуемый материал смешанный с физиологическим раствором. Реакцию нейтрализации учитывают сразу же после того, как произошла гибель контрольных мышей. Мыши, оставшиеся живыми, в случае гибели контрольных, указывают на наличие в пробе токсина, соответствующего той сыворотке, которую вводили в смеси с испытуемым материалом выжившим мышам.

VI. Иной механизм имеет реакция нейтрализации вирусов антителами иммунной сыворотки. В этой реакции участвуют два компонента: сыворотка и вирус. Для ее постановки неразведенную сыворотку смешивают с серийными разведениями живого вируса или наоборот, постоянные дозы вируса с равными разведениями сыворотки. Вирусы в смеси со специфическими иммунными сыворотками инактивируются. Для диагностики вирусных заболеваний реакцию нейтрализации можно применять на животных, на курином эмбрионе и на культуре тканей.

Инфекционный материал, содержащий вирус, смешивается с иммунной сывороткой. После инкубации вводят эту смесь восприимчивому животному, служащему индикатором присутствия или отсутствия в смеси активного агента. Контрольному животному вводят смесь вируса с нормальной сывороткой, которая заведомо не содержит нейтрализующих антител.

 

 

 

 

                                                                               

Наверх страницы

Внимание! Не забудьте ознакомиться с остальными документами данного пользователя!

Соседние файлы в текущем каталоге:

На сайте уже 21970 файлов общим размером 9.9 ГБ.

Наш сайт представляет собой Сервис, где студенты самых различных специальностей могут делиться своей учебой. Для удобства организован онлайн просмотр содержимого самых разных форматов файлов с возможностью их скачивания. У нас можно найти курсовые и лабораторные работы, дипломные работы и диссертации, лекции и шпаргалки, учебники, чертежи, инструкции, пособия и методички - можно найти любые учебные материалы. Наш полезный сервис предназначен прежде всего для помощи студентам в учёбе, ведь разобраться с любым предметом всегда быстрее когда можно посмотреть примеры, ознакомится более углубленно по той или иной теме. Все материалы на сайте представлены для ознакомления и загружены самими пользователями. Учитесь с нами, учитесь на пятерки и становитесь самыми грамотными специалистами своей профессии.

Не нашли нужный документ? Воспользуйтесь поиском по содержимому всех файлов сайта:



Каждый день, проснувшись по утру, заходи на obmendoc.ru

Товарищ, не ленись - делись файлами и новому учись!

Яндекс.Метрика